全国颈椎病治疗费用联盟

在线cIEF-MS对蛋白药物电荷异构体的进行理化鉴定

iBio大师说 2019-12-01 14:43:36

单克隆抗体是复杂的四聚体糖蛋白,常呈现微观不均一性,即“异质性”,包括电荷、疏水、形态等相关的异构体。这些异构体可能来自于抗体分子复杂的生命合成途径,也可能来自于纯化、制剂等制造过程以及贮存过程的任何阶段。电荷异构体宏观表现为定点聚焦点用途上出现弥散或多个条带,离子交换色谱图主峰前后出现小峰。由于异构体可能会影响抗体的稳定性、药效、免疫原性或药代动力学,对电荷异构体进行深度表征是至关重要的。常见的分析方法有离子交换色谱法IEC、等电聚焦电泳法IEF、毛细管等电聚焦法cIEF等。其中cIEF因为操作简单,自动化程度高,分辨率高,重复性好,逐渐成为最主要的分析手段。但是,由于CE只能获得有限信息,不能对每个异构体进行结构鉴定,因此进行深度结构解析往往还要使用IEC分离组分。

最近,百时美施贵宝公司BMS的研究人员开发了一种在线cIEF-MS联用的方法,可以方便地对异构体进行结构鉴定。

在文章中,他们采用了美国CMP Scientific公司的ESI离子源,联用了Agilent的CE和MS,通过对cIEF方法的优化,对多个市售抗体的电荷异构体进行了在线cIEF-MS方法开发,并与icIEF(全柱成像毛细管定点聚焦)的分辨率进行了比较。

尽管在完整分子水平对蛋白进行结构表证还需更高性能的质谱仪器的支持,但是通过cIEF-MS与icIEF的分辨率对比,可以确认,通过这种在线cIEF-MS分析的方法可以在更高性能的质谱上直接对电荷异构体进行结构表证,用于支持抗体药物研发。


关于美国CMP Scientific的CE-MS联用专用ESI离子源,或者相关产品及应用信息,欢迎通过扫描下方二维码与我们联系。您也可以通过拨打13918897495或者发送邮件到yh_ibio@163.com与我们联系。